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前言

水杨酸，分子式为c₇h₆o₃，是植物柳树皮提取物，是一种天然的消炎药。水杨酸可以杀菌、消炎，从而常被用于对水产动物体表的水霉、鳃霉的剥离分解及伤口修复，水产动物因红斑、皮肤病、打印、赤皮、烂尾、溃烂、腐皮、肤霉、脱粘、白头白嘴、烂鳃、水肿、出血等引起的多种伤口能快速愈合。本品定期使用能有效预防和降低水产品发病率并快速净化水体，从而抑制降解水体中的各种杂菌及病原体，但长期过量使用会造成药物在动物体内富集，人类食用这些水产品会使残留的兽药进入人体，从而影响人体健康。

本文参照《鱼可食性组织中水杨酸残留量的测定液相色谱-串联质谱法(征求意见稿)》，利用ezsep™hrm-lipid固相萃取柱（300mg/6ml，货号：pz12624） 净化样品，再通过高效液相色谱串联质谱检测进行检测，建立了鱼肉中水杨酸残留量的分析方法。

实验过程

1.1 仪器与试剂

mprep-spe08手动固相萃取装置，货号：pz0008，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

e.t.氮吹浓缩仪，货号：c020017，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

4500质谱系统，sciex公司；

ezsep™hrm-lipid固相萃取柱（300 mg/6ml，货号：pz12624），北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

冷冻离心机，gl-20g-ⅱ，上海安亭科学仪器厂；

乙腈（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

甲酸（分析纯），购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2 工作液配制

水杨酸标准物质：100mg/瓶，购自坛墨质检标准物质中心。

水杨酸标准储备液：取水杨酸标准品适量(相当于有效成分约10mg)，精密称定，用乙腈稀释至10ml容量瓶中，配制成浓度为1000μg/ml的水杨酸标准储备液。

水杨酸d4标准储备液：浓度为100μg/ml溶剂为甲醇，购自上海安谱实验科技股份有限公司。

水杨酸标准中间液：移取水杨酸标准储备液0.1ml，用乙腈稀释至10ml容量瓶中，配制成浓度为10μg/ml的水杨酸标准中间液。

水杨酸标准使用液：水杨酸标准中间液1.0ml，用乙腈稀释至10ml容量瓶中，配制成浓度为1.0μg/ml的水杨酸标准使用液。

水杨酸d4标准使用液:移取水杨酸标准储备液0.1ml，用乙腈稀释至10ml容量瓶中，配制成浓度为1.0μg/ml的水杨酸d4标准使用液。

依次移取1.0μg/ml的水杨酸标准使用液0、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.0ml，分别置于10ml容量瓶中并均加入水杨酸d4标准使用液0.2ml，以0.1%甲酸水溶液定容至刻度，得到浓度依次为0μg/l、2μg/l、5μg/l、10μg/l、20μg/l、50μg/l、100μg/l的标准系列工作液，水杨酸d4浓度固定为20μg/l。

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

取鱼肉试样2g，置于50ml聚丙烯离心管中，添加水杨酸d4标准工作液40μl，加5%甲酸乙腈溶液10.0ml，涡旋混匀1min超声提取10min，10000r/min冷冻离心5min，收集上清液5.0ml待净化

1.3.2 固相萃取净化

ezsep™hrm-lipid固相萃取柱（300 mg/6ml，货号：pz12624）用5ml乙腈进行活化，取1.3.1待净化液上样，收集流出液，以e.t.氮吹浓缩仪，40℃氮气浓缩至近干，加1.0ml0.1%甲酸水溶液，涡旋混匀过微孔滤膜后供lc-ms/ms测定。

1.3.1 lc-ms/ms仪器条件

色谱柱：shim-pack velox c18（2.7μm，2.1*100mm）；

检测方式：多反应监测（mrm）；

流动相：a：0.1%甲酸水溶液；b：乙腈；

流速：0.3ml/min。

表1 流动相梯度洗脱表

实验结果

表2 加标回收率

图1 标液色谱图

图2 空白样品色谱图

图3 10μg/kg样品添加色谱图

实验结论

本实验使用ezsep™hrm-lipid固相萃取柱（300mg/6ml，货号：pz12624） 对鱼肉样品进行净化，通过高效液相色谱串联质谱测定其中的水杨酸残留量，该方法的加标回收率在95.0%~105.3%之间，rsd为3.8%，满足标准要求。测试结果说明ezsep™hrm-lipid固相萃取柱（300 mg/6ml，货号：pz12624）能很好的完成方法中的净化工作，并且结果稳定、可靠。

参考文献

[1] 《鱼可食性组织中水杨酸残留量的测定液相色谱-串联质谱法(征求意见稿)》